Точность количественной оценки окисления ДНК сперматозоидов человека и определение порогового значения с использованием 8-OHdG иммунодетекторного анализа

Вопрос исследования:
Можно ли определить дискриминантный порог для показателя окисления ДНК сперматозоидов человека?

Краткий ответ:
Был обнаружен дискриминантный порог, который был равен 65.8% сперматозоидов с положительной окраской на 8-гидрокси-2’-дезоксигуанозин (8-OHdG) и средней интенсивности флуоресценции (СИФ) в 552 относительных единицы.

Что уже известно:
Известно, что оксидативный стресс ухудшает качество спермы и оплодотворяющую способность. Однако текущая практика не включает в себя рутинные методы определения оксидативного повреждения ДНК в сперматозоидах; отсутствуют оптимизированные консенсусные протоколы, и не установлен порог нормальности.

Дизайн, объем и продолжительность исследования:
Внутри- и межметодные сравнения между 4 протоколами (I-IV) были проведены для определения наиболее релевантных и эффективных методов оценки содержания 8-оксо-dG в сперматозоидах человека. Тесты на воспроизводимость, специфичность, чувствительность и стабильность выполнялись для валидации оптимизированной методологии для рутинного использования в диагностике.

Участники/материалы, условия и методы:
В этом проспективном исследовании сравнивались три иммунологических метода, а именно иммуноцитохимия, флуоресцентная микроскопия и проточная цитометрия. Окисление ДНК сперматозоидов у 80 пациентов определяли относительно параметров спермы и клинических состояний с использованием выбранного иммунологического протокола в сравнении с коммерческим набором. Эти пациенты (возраст 35 ± 1 лет: среднее ± SEM) имели нормозооспермию (n = 40) или изменённые параметры (некро- или / и астено- или / и тератозооспермия или / и лейкоцитоспермия).

Основные результаты и влияние случайности:
Значительная положительная корреляция Пирсона и Спирмена была определена для значений 8-OHdG и параметров сперматозоидов с использованием протокола III. Значительная высокая и положительная корреляция была выявлена для СИФ с ИМТ и концентрацией лейкоцитов.

Протокол III был наиболее дискриминативным методом в отношении анализа воспроизводимости, специфичности, чувствительности, стабильности и надёжности при изменении параметров спермограммы, особенно в отношении лейкоцитоспермии, согласно параметрическим или непараметрическим тестам и определению размера воздействия и факториального анализа, такого как анализ главных компонентов и фактор-дискриминантного анализа.

Интересно, что у 39% пациентов с «патологическими» значениями окисления ДНК сперматозоидов отмечалась нормозооспермия.

Ограничения, причины для осторожности:
Популяция с олигозооспермией не оценивалась в данном исследовании т. к. для проведения подобных сравнений было недостаточно материала. Однако в статистическом анализе учитывалась концентрация сперматозоидов.

Более широкие выводы из полученных результатов:
Наше исследование является первой валидацией протокола для определения дискриминантного порога для окисления ДНК сперматозоидов человека. Были продемонстрированы точность выявления 8-OHdG-остатков в ДНК сперматозоидов человека, стабильность во времени и его связь с качеством сперматозоидов. Анализ должен найти применение в диагностике мужского фактора бесплодия, связанного с оксидативным стрессом.

Финансирование исследования / конфликт интересов:
Эта работа финансировалась за счет институтских грантов от CNRS, INSERM и Université Clermont Auvergne (J. R. D.), а также исследовательских фондов Clinerm-CEROS Clermont-Ferrand (L. J. и F. B.). P. G., A. M., R. J. A. и J. D. являются, соответственно, генеральным директором, научным директором и научными консультантами американской биотехнологической компании (Celloxess, Принстон, Нью-Джерси, США), занимающейся профилактической медициной с акцентом на производство антиоксидантных пероральных добавок.


Аннотация:
Разработан метод количественного определения степени окисления ДНК сперматозоидов человека.

Авторы: S Vorilhon, F Brugnon, A Kocer, S Dollet, C Bourgne, M Berger, L Janny, B Pereira, R J Aitken , A Moazamian, P Gharagozloo, J Drevet, H Pons-Rejraji.
CHU Clermont Ferrand, CHU Estaing, Laboratoire de Biologie du Développement et de la Reproduction, AMP, CECOS, F-63003 Clermont-Ferrand, France
Université Clermont Auvergne, CNRS UMR6293, INSERM U1103, GReD, F-63000 Clermont-Ferrand, France

Журнал: Human Reproduction, Volume 33, Issue 4, 1 April 2018, Pages 553–562
DOI: https://doi.org/10.1093/humrep/dey038
Ссылка на источник

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.